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探討液氮冷凍法制備家兔股骨頭壞死

點(diǎn)擊次數(shù):1706 更新時(shí)間:2017-05-15

探討液氮冷凍法制備家兔股骨頭壞死

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:10只成年新西蘭大白兔,雌雄不限,年齡4~5個(gè)月,體質(zhì)量2.5~3.5kg。

1.2實(shí)驗(yàn)方法:所用動(dòng)物的雙側(cè)股骨頭均參加實(shí)驗(yàn),將動(dòng)物俯臥位固定,取髖關(guān)節(jié)后側(cè)切口,暴露關(guān)節(jié)囊并十字切開,內(nèi)旋股骨,顯露股骨頭的負(fù)重區(qū),在不切斷股骨頭(圓)韌帶,髖關(guān)節(jié)不造成脫位的基礎(chǔ)上,保護(hù)周圍組織,以液氮棉團(tuán)連續(xù)快速冷凍股骨頭8次,共約3min,關(guān)閉手術(shù)切口。術(shù)后肌肉注射慶大霉素,以預(yù)防術(shù)后感染。

1.3股骨頭標(biāo)本的制作和觀察:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在麻醉下,分別于術(shù)后3、7d各處死1只,術(shù)后2、4、6、8周各處死2只,進(jìn)行股骨頭標(biāo)本的大體解剖學(xué)觀察和X線檢查。經(jīng)10%甲醛溶液固定股骨頭標(biāo)本,用8%甲酸溶液脫鈣處理,石蠟包埋,組織切片,HE染色后,進(jìn)行光鏡觀察和攝像。

2結(jié)果

2.1股骨頭標(biāo)本的大體觀察:造模3d的股骨頭標(biāo)本,外形圓而光滑,關(guān)節(jié)軟骨呈蒼白色,7d的標(biāo)本與3d情況無明顯區(qū)別。2周時(shí),股骨頭外形圓滑,有2例標(biāo)本關(guān)節(jié)軟骨面出現(xiàn)少許剝脫,關(guān)節(jié)軟骨呈蒼白色;4周時(shí),有3例股骨頭標(biāo)本關(guān)節(jié)面出現(xiàn)輕度塌陷,所有關(guān)節(jié)軟骨均有輕度剝脫。6周時(shí),股骨頭外形仍呈圓形,關(guān)節(jié)軟骨剝脫加重。8周時(shí),關(guān)節(jié)軟骨呈蒼白色,剝脫嚴(yán)重,關(guān)節(jié)軟骨下有骨暴露,并有1例失去其圓形輪廓,呈現(xiàn)骨性關(guān)節(jié)炎樣改變(圖1)。

2.2股骨頭標(biāo)本的X線觀察:造模3d的股骨頭外形圓,骨密度無明顯變化,骨小梁結(jié)構(gòu)正常;7d時(shí)的標(biāo)本,X線表現(xiàn)與3d時(shí)無明顯差別。2周時(shí),股骨頭外形圓,骨密度有所增加,骨小梁結(jié)構(gòu)完整。4周時(shí),有3例股骨頭輕度變扁,并有骨刺樣結(jié)構(gòu)形成,骨密度增加,骨小梁結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂(圖2)。6周時(shí),股骨頭外形圓,骨密度明顯增加,骨小梁結(jié)構(gòu)變得紊亂,出現(xiàn)軟骨下囊性變。8周時(shí),股骨頭標(biāo)本外形圓,骨密度高,骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂,軟骨下呈囊性變;有1例股骨頭標(biāo)本,正常外形喪失、變小。

2.3股骨頭標(biāo)本的組織學(xué)觀察:在造模3d時(shí)的股骨頭組織切片上,冷凍區(qū)和周圍部的軟骨細(xì)胞出現(xiàn)壞死,骨細(xì)胞和骨髓組織也呈現(xiàn)壞死,遠(yuǎn)離冷凍區(qū)的骨組織壞死較輕。關(guān)節(jié)軟骨表面光滑,骨小梁結(jié)構(gòu)正常,骨陷窩空虛。7d時(shí)的標(biāo)本和3d時(shí)無明顯區(qū)別。2周時(shí),可見骨髓纖維化,并有骨髓基質(zhì)細(xì)胞,出現(xiàn)于壞死的骨小梁周圍(圖3)。有2例股骨頭標(biāo)本,關(guān)節(jié)軟骨下有較多的破骨細(xì)胞聚集(圖4)。關(guān)節(jié)軟骨表面輕度毛糙,部分軟骨細(xì)胞呈灶性增生,并出現(xiàn)爬行修復(fù)現(xiàn)象(圖5)。骨小梁結(jié)構(gòu)完整,骨陷窩空虛,骨小梁周圍出現(xiàn)附加骨組織(圖6),在部分標(biāo)本的骨小梁間,有新生類骨質(zhì)形成。4周時(shí),出現(xiàn)骨髓增生,骨組織修復(fù)比2周時(shí)更加活躍,骨小梁和新生類骨質(zhì)較2周時(shí)更為增多。關(guān)節(jié)軟骨表面毛糙,部分出現(xiàn)剝脫。有少數(shù)的骨小梁變細(xì)或出現(xiàn)折痕,骨陷窩空虛;有3例股骨頭標(biāo)本,軟骨下骨組織修復(fù)旺盛,軟骨下的骨小梁變細(xì)、形態(tài)不規(guī)則或出現(xiàn)折痕(圖7),甚至出現(xiàn)股骨頭關(guān)節(jié)面的塌陷(圖8)。6周時(shí),骨組織修復(fù)繼續(xù)進(jìn)行,部分軟骨剝脫,軟骨下出現(xiàn)骨暴露。骨小梁變細(xì),出現(xiàn)折痕或吸收現(xiàn)象;骨陷窩空虛,骨小梁附加骨和新生類骨質(zhì)較多。8周時(shí),關(guān)節(jié)軟骨剝脫嚴(yán)重,骨小梁紊亂,骨陷窩空虛,出現(xiàn)大量的骨小梁附加骨和新生類骨質(zhì)。

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